都有哪些因素是導致分光光度計的測量誤差來(lái)源 分光光度計是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收的特性,以較純的單色光作為入射光,測定物質(zhì)對光的吸收,從而對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的儀器。在使用過(guò)程中常常會(huì )出現測量誤差,這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢?
1 復色光對比耳定律的偏離
比耳定律成立的前提條件是入射光是單色光,但是精度再高的儀器,即使是雙單色器的分光光度計,也只能獲得近乎單色的光,無(wú)法獲得純單色光,它仍然含有狹窄光通帶,具有復色光的性質(zhì)。而復色光會(huì )導致比耳定律的正或負偏離。固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm,可調狹縫的可以做到0.Inm;可見(jiàn)分光光度計帶寬6nm、snm,甚至十幾納米。光譜帶寬應該是越小越好,但是隨著(zhù)光譜分辨率的提高,儀器的靈敏度降低,所以選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響。當溶液濃度較小且單色光較純時(shí),可近似認為符合比耳定律。
2 雜散光的影響
雜散光是指進(jìn)入檢測器的處于待測波長(cháng)光譜帶寬范圍外的其他波長(cháng)組分,它是光譜測量中誤差的主要來(lái)源。產(chǎn)生原因有:分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長(cháng)處,由于單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低,雜散光的影響更為顯著(zhù)。雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴重的測量誤差,實(shí)際工作中,在定量分析時(shí),一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度,如果在分析波長(cháng)處含有雜散光,這時(shí)樣品的透光率較小,而雜散光大部分透過(guò),使測量吸光度低于真實(shí)吸光度。
3 儀器噪聲對測t的影響
儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標,它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號,掃描100%T和0%T線(xiàn),可觀(guān)察到分光光度計的噪聲水平,如果儀器噪聲較大,會(huì )掩蓋較小的測量信號,一般用噪音的二倍來(lái)表示儀器的靈敏度。
4 波長(cháng)和吸光度準確度
樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長(cháng)下測得的,如果波長(cháng)誤差很大,測出的值肯定不準。吸光度準確度也是用戶(hù)對儀器的直接要求,更應引起足夠的重視。國家計量檢定規程規定雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計透射比準確度為*士0.6%, B級土1.0%。